Download The Sugars and Amino Acids "building blocks" in S and

durch den dem A T P proportionalen Abfall der Extinktion bei 340 m/u bestimmt bzw. durch Messung des Einbaus von radioaktivem Phosphat [mit 90 000 ipm 32 P]
in organisches Phosphat. NADPH 2 wurde nach der Belichtung in den hochtourig abzentrifugierten Proben
durch die Extinktion bei 340 m/u bestimmt. Die Werte
der 02-Entwicklung in der Kontrolle ohne Hemmstoff
betrugen etwa 3//Mol 0 2 /l5 Min./Gefäß = 60 //Mol
02/Stde./mg Chlorophyll, die ATP-Bildung etwa
6//Mol ATP/15 Min./Gefäß = 120//Mol ATP/Stde./
mg Chlrophyll. Der p/50-Wert wurde aus der durch
Auftragung der Hemmung in % gegen die Konzentra-
tion erhaltenen Kurve bestimmt. Die Steilheit der Geraden ist nicht bei allen Substanzen gleich, wurde aber
in unseren Überlegungen bisher nicht berücksichtigt.
Die Kernresonanzspektren wurden mit einem Varian
A-60-Spektrometer bei 25 °C aufgenommen *. Die
Substanzen wurden 0,4-m. in Pyridin gelöst. Als innerer Standard diente Tetramethylsilan.
* W i r d a n k e n H e r r n D r . NEUDERT u n d H e r r n D r . G. SCHULZ
von der physikalisch-chemischen Abteilung des Hauptlaboratoriums der Schering AG für die Aufnahme der Spektren.
The Sugars and Amino Acids "building blocks" in S and R Strains of Different
Brucella Serobiotypes, their Cell Walls and Endotoxins
J . PARNAS,
M . TUSZKIEWICZ,
E . PLESZCZYNSKA,
S. POPLAWSKI,
and
C.
MARDAROWICZ
The Academy of Medicine, Department of Microbiology in Lublin/Poland
(Z. Naturforsdi. 23 b, 348—350 [1968]; eingegangen am 22. Juni 1967)
This paper presents the research of the sugars and aminoacids composition of all Brucella serobiotypes in S and R phase, by differents methods of chromatography; the glycolipoproteins and
lipolysaccharides were also examined 3.
Material and Methods
B r u c e l l a s t r a i n s i n S P h a s e : Br. melitensis 16 M, Br. abcortus 12, Br. suis 1330, Br. rangiferi, Br. suis (0), Br. neotomae, Br. abortus S 19.
Brucella strains simultanously
examined in S and R Phase: Br. melitensis 16 M, Br.
melitensis 3 m/Z, Br. abortus 544, Br. abortus 10, Br.
suis 1330.
B r u c e l l a s t r a i n s i n R P h a s e : Br. melitensis 110 m/Z, Br. melitensis 570 (Ostrowskaia), Br.
melitensis 512 (Ostr.), Br. suis m/Z were used. All
Brucellae suspensions were washed 3 times exactly
by phys. solution.
A c e t o n k i l d b a c t e r i a (full antigen) all Brucella strains in S and R Phase were prepared according
to OLITZKI a n d PARNAS 9 '
10
.
C e l l w a l l s from Br. abortus
cording to W E I D E L method 15 -16.
were presared ac-
G l y c o l i p o p r o t e i n s by B O I V I N method 14 from
Br. melitensis 16 M, Br. abortus 544 and Br. suis 1330
in pure S Phase were prepared.
L i p o l y s a c c h a r i d e s prepared by "Phenolwater" Method in W E S T P H A L - L Ü D E R I T Z - B I S T E R modification 17 , from Br. melitensis 16 M, Br. abortus 544 and
rB. suis 1330 in pure S phase, were examinated.
1
M . BÖRGER, Z b l . B a k t e r i o l . I. A b t . O r i g . 1 9 0 , 4 7 [ 1 9 6 3 ] .
2
1 . 1 . DUBROWSKAIA, B i o c h i m i a 1 5 , 4 9 0 [ 1 9 5 0 ] .
1 . 1 . DUBROWSKAIA, B i o c h i m i a 1 9 , 1 3 7 [ 1 9 5 4 ] .
I . I . DUBROWSKAIA, B i o c h i m i a 2 9 , 8 4 6 [ 1 9 6 4 ] .
F . KAUFMAN, O . LÜDERITZ, H . STIERLIN, a n d O .
3
4
5
The choromatography for sugars were used in following 4 systems (Whatman 1) :
a) Hydrolysis in 2-n. H C l - 1 0 0 ° C - 1 and 4 hours;
Aceticaethyl-Pyridine — Water — Aceticacid
(8:3:8:
0,5).
b) Hydrolysis in 2-n. H C l - 1 0 0 ° C - 2 and 3,5
hours; nButanol —Pyridine —Water ( 6 : 4 : 3 ) .
c) Hydrolysis in 2-n. H C l - 1 0 0 ° C - 2 and 3,5
hours; Aceton — n Butanol — Water (7 : 2 : 1).
d) Hydrolysis in 2-n. H C l - 1 0 0 ° C - 2 and 3,5
hours; Butanol —Aceticacid —Water ( 4 : 1 : 5).
The control sugars: D-Glucosamine, D-Galactose, DGlucose, D-Mannose, L-Rhamnose, DL-Arabinose, Xylose,
Ribose, Galactosamin (Merck-Darmstadt).
The chromatography for aminoacids (Whatman 4) :
hydrolysis in 6-n. H C l - 1 0 0 ° C - 2 4 hours; ButanolAceticacid — Water ( 4 : 1 : 1) and 90 proc. phenol.
The thinlayer chromatography for 2-Desoxyhexoses 6
in Silikagel G (Institut of Chemistry, Lab. Monosaccharides-Prague).
Hydrolysis in 2-n. HCl - 1 0 0 °C - 1 5 , 30, 60 and
120 minuts. Chlorophorm-Aethanol (5 : 1,0) ; H 2 S 0 4
conc. in flame. The control sugars from dr Jary-Inst.
Chem. Prague were used.
The thinlayer chromatography of cell walls acc. to
STAHL 12 method were used.
The chromatography acc. to P R I M O S I G H 11 for muropeptids were also used.
Zbl. Bakteriol. 178, 442 [1960].
6
7
L. LABLER U. V. SCHWARZ, a k o l e k t i v — C h r o m a t o g r a f i e n a
tenke vrstwe — Praha 1965.
C. MARDAROWICZ, Z. Naturforschg. 21b, 1006 [1966].
WESTPHAL,
Unauthenticated
Download Date | 8/3/17 7:20 PM
S
Brucella
substances
R
HexosHexoses
amine
D-Gluco- D-Galak- D-G1Uamin
tose
cose
Sugar „ b u i l d i n g b l o c k s "
6-DesoxyPentoses
hexoses
D-Man- L-Rham- DL-AraXylose
nose
nose
binose
Aceton killed
melitensis
S
melitensis
R
abortus
S
abortus
R
suis
S
suis
R
Glycolipopolipeptides
Boivin
melitensis
S
abortus
S
suis
Lipopolysaccharides
melitensis
abortus
suis
Ribose
Uronic
acid
Ribose
2-Desoxyhexoses
Abequose
X
X
X
X
X
X
Table 1. The Sugar "building blödes" in S and R Colonies of Brucellae Serobiotypes and their Endotoxins. • = present in
all chromatogramms, o = present in the majority of chromatogramms, ? = not present in all chromatogramms, X = not examined, — = not present. All others Brucella strains mentioned in the text the same composition.
Amino acids
mS
mR
aS
aR
sS
sR
ran. S
cell walls structures
full
degrasacculus
dated
c.w.
Alanine
Arginine
Cystine
Glutamin acid
Asparagine acid
Glycocol
Histidine
Lysine
Leucine
Phenylalanine
Threonine
Tyrosine
Valine
Serine
Proline
Aminobutteracid
Diaminopimelin
acid
Methionine
Oxyproline
Ornithine
Muramine acid
Table 2. The Amino Acid "building blocks" in S and R Brucellae Serobiotypes and their Cell Walls. mS, mR = Brucella
melitensis in S and R phase; aS, aR = Brucella abortus; ran. S = Brucella rangiferi in S phase; sS, sR = Brucella suis. All
other Brucella strains mentioned in this text show the same composition.
Results
Table
1 presents the sugar composition in all
Brucellae serobiotypes, in S and R phase, and also
in glycolipoproteins and lipopolysaccharides
14.
Table 2 presents the amino acids composition in
all Brucella serobiotypes in S and R phase, and
also in the cell walls structures of Brucella.
W e can c o n f i r m that in all examined Brucella
serobiotypes in S and R phase, the glycolipopolypro-
Unauthenticated
Download Date | 8/3/17 7:20 PM
teins and lipopolysaccharides, also the full cell walls,
and
present
groups, and with the stereochemical configuration of
one
"chemotype".
One
can
judge
that
sugar
"building
blocks",
their
determinants
the antigenic specifity of Brucella serobiotypes in
the macromolecules, being in the cell walls of Bru-
S — R phase, and their immunological activity is tied
cellae
8'13.
with the composition and sequence of amino acids
8
9
10
K. C. MILNER, Consultations in Years 1963 — 1967 [Institute of Inf. Disease and All. Rocky Mountain Laboratory
in Hamilton — Montana — USA].
A. L . OLITZKI a n d D . SULITZEANU, B r i t . J . e x p . P a t h o l . 3 9 , 3
[1958].
J. PARNAS and T. MIERZEJEWSKI, Acta microbiol. polon. 5,
353
11
12
13
14
15
W . WEIDEL,
Bio-
chim. biophysica Acta [Amsterdam] 46, 68 [1961].
E. STAHL,Dünnschichtchromatographie. Ein Laborhandbuch.
Springer-Verlag, Berlin 1962.
[1958].
M. TUSZKIEWICZ, Habilitationsdissertation. Die Akademie
der Medizin Lublin 1966.
W. WEIDEL, Angew. Chem. 19, 801 [1964].
16 ^
WEIDEL, H . FRANK, a n d H . MARTIN, J . g e n .
Microbiol.
2 2 , 1 , 1 5 8 [I960].
[1956].
J . PRIMOSIGH, H . PELZER, D . MAASS, a n d
B . S. TEPPER a n d J . B . WILSON, J . i n f e c t . D i s e a s e s 1 0 3 , 19
17
0 . WESTPHAL, O . LÜDERITZ, a n d F . BISTER, Z .
Naturforschg.
7 b, 148 [1952].
Selektive Thermosensibilisierung von Ehrlich-Mäuse-Ascites-Krebszellen
durch Diäthylstilboestrol
M . VON A R D E N N E u n d P . G .
REITNAUER
Mitteilung aus dem Forschungsinstitut Manfred von Ardenne, Dresden-Weißer Hirsch
(Z. Naturforsdi. 23 b, 350—356 [1968]; eingegangen am 24. Juli 1967)
Die Information, daß verschiedene Sexualhormone bei Konzentrationen um 1 0 ~ 5 g m l ~ 1 die
Atmung von EMAC-Zellen sehr stark hemmen, während bei Herz- und Leberzellen die Hemmung
erst bei um zwei Zehnerpotenzen höheren Konzentrationen eintritt, veranlaßte uns dazu, die Eignung von Diäthylstilboestrol zur selektiven Thermosensibilisierung von Krebszellen zu untersuchen.
Aus wiedergegebenen in-vitro-Messungen mit Ehrlich-Mäuse-Ascites-Carcinom-Zellen geht hervor,
daß diese relativ ungiftige Substanz sich hervorragend zur selektiven Thermosensibilisierung von
Krebszellen eignet. Die Sensibilisierungs-Wirkung bleibt auch unter nahezu anaeroben Bedingungen bestehen und setzt schon bei der relativ niedrigen Konzentration von 1 bis 3 - 1 0 ~ 6 g m l - 1 ein.
Die in-vitro-Beobachtung überadditiver Effekte beim Zusammenwirken schwacher Konzentrationen
(Dosen) von Diäthylstilboestrol und Vitamin K 3 bzw. analog wirkender Substanzen bei verschiedenen Temperaturen veranlaßt zur Formulierung des therapeutischen Prinzips steigender Gesamtwirkung durch Kombination vieler (etwa gleich starker) Angriffe mit abnehmender Einzeldosis auf das
gleiche System.
Wie zuerst beim Vitamin K 3 beobachtet, besteht auch beim Diäthylstilboestrol eine sehr starke
Streuung der Sensibilisierungs-Wirkung zwischen verschiedenen Zellsuspensionen. Gegenwärtig wird
versucht, diese Streuung durch gezielte weitere chemische Maßnahmen herabzusetzen. — Aus invitro-Messungen über den Einfluß der Hyperthermie-Temperatur ist zu erwarten, daß bei Steigerung der Körpertemperatur von 37 °C auf 41 °C die Wirkung der Hyperthermie durch Diäthylstilboestrol (evtl. + Vitamin Ks) bzw. die Wirkung des Diäthylstilboestrols durch Hyperthermie
(evtl. + Vitamin Kz) vervielfacht wird. Die Wirkungszunahme ist gerade dann besonders stark,
wenn die chemische Attacke allein nur schwache Effekte hat. Dies ist ein Ergebnis, das wahrscheinlich bald im klinischen Bereich ausgenutzt werden kann. — Nach Besprechung der toxikologischen
Daten wird auf die in-vivo-Dosierung von Diäthylstilboestrol eingegangen. Aus Messungen an Kleintieren wird abgeschätzt, daß bei i.v.-Dauerinfusion (200 min) einer verträglichen Dosis in den Körpergeweben stationär Konzentrationen von Diäthylstilboestrol erhalten werden, die höher und z. T.
sogar wesentlich höher liegen als die zur Thermosensibilisierung von EMAC-Zellen notwendige
Konzentration. Die günstige Pharmakokinetik des Diäthylstilboestrols erklärt sich z. T. dadurch,
daß diese Substanz im Organismus kaum abgebaut wird. In-vivo-Versuche mit Kleintieren bestätigten den selektiven Charakter der Thermosensibilisierung von Krebszellen mit Diäthylstilboestrol.
1. Selektive Diäthylstilboestrol-Wirkung auf
Krebszellen bei normaler Temperatur
statakrebses mit Hilfe von Diäthylstilboestrol
(Ds)
(4.4-Dioxy-a,y?-diäthyl-stilben) ist bis zum heutigen
Tage die einzige chemische Krebstherapie am mensch-
Die mit dem N a m e n von
CHARLES
HUGGINS
bundene Chemotherapie des metastasierenden
ver-
lichen Organismus geblieben, bei der mit nicht ge-
Pro-
ringer Wahrscheinlichkeit ein über Jahre anhalten-
Unauthenticated
Download Date | 8/3/17 7:20 PM