Download PEMURNIAN_DAN_KARAKTERISASI_ENZIM_ASETIL

Donny Nugraha M
20508024
PENDAHULUAN

MEKANISME
REAKSI


TEKNIK
ANALISIS
PENGGUNAAN

KESIMPULAN
AGENDA
Senyawa yang dioksidasi siklus Krebs
ASETIL-CoA
“As donor substrats in co-translational, posttranslational or chemical modification :
acetylation”
3.1.2.1

NC-IUBMB

Acetyl-CoA acylase, acetyl-CoA thiol
esterase, acetyl-CoA deacylase, Ach1

Pertama ditemukan di hati babi (1952)

Hati & otak Tikus, Jaringan adiposa
Hamster, Saccharomyces cerevisiae
MEKANISME
REAKSI
Mengkatalisis reaksi hidrolisis Asetil-CoA
menjadi Asetat dan CoA
TEKNIK
ANALISIS
Gel Filtration
DEAESDS-PAGE
– Sepharose
chromatography
(Sodium Dodecyl SulphatePolyAcrilamide-Gel Electrophoresis)
TEKNIK
ANALISIS
Homogenity and Molecular Properties
Menggunakan prosedur kromatografi DEAE-Sepharose,
Sepharose CL-4B, Hidroxilapatit
Enzim terdiri kira-kira 0,2 % dari total “Cellular protein”
Molecular Weight Analysis
Menggunakan elektroforesis jel - metode Laemmli dan
dibandingkan dengan berat molekul standar (miosin 205kDa,
Bovin serum albumin 66kDa)
Mr 64,000 ± 5,000 . monomeric
TEKNIK
ANALISIS
Isoelectric Analysis
Pita “ Single protein”
pada pI=5,8
pH Dependence Analysis
Pengujian pH dari 4
Sampai 10
TEKNIK
ANALISIS
Temperature Optimum Analysis
Aktivitas enzim dari 5
sampai 65C ,maksimum
terjadi pada 37 -42C
Amino Acid Analysis
TEKNIK
ANALISIS
Substrat Specificity Analysis
PENGGUNAAN
Pharmaceutical Uses
Enzyme would inhibit acetylation of platelets, thus increasing
clotting time
Agriculture Uses
KESIMPULAN
 Mr 64,000 ± 5000 Da
 Isoelectric point 5,8
 pH optimum 8,0
 Temperatur Optimum 37 – 42C
 Irreversibel denaturasi setelah 1 menit pada 70C
 Substrat tergantung spesifisitas
Organisme
Senyawa
Aktifasi
TO
(oC)
Sumber
Jaringan
Lokalisasi Inhibitor
Sitosol,
2,3lisososm, Butanedio
peroksisom ne, ADP
Rattus
norvegicus
3thiadicarboxylic
acid
37
Otak, jaringan
adipose, hati,
jantung
Mus musculus
L(-)-Carnitin
37
Hati
Mesocricetus
auratus
ADP
37
Trypanosoma
brucei brucei
GDP
37
Flagelata
Pisum sativum
-
37
Daun
Saccharomyces
cerevisiae
Asetat
37
-
Sitosol
ADP
Jaringan adipose, Mitokondrio Koenzim
hati
n
A
-
ATP, ADP
Mitokondrio Koenzim
n
A
Sitoplasma Glukosa
Substrat
Produk
Organisme
3-butenoyl-CoA
3-butenoate + CoA
asetoasetyl-CoA
asetoasetate + CoA
Acidaminococcus
fermentans
Ovis aries
asetoasetyl-CoA
asetoasetate + CoA
Rattus norvegicus
asetyl-CoA + H2O
CoA + asetate
Ascaris suum
asetyl-CoA + H2O
CoA + asetate
Homo sapiens