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Articles : SNAP-25 Modulation of Calcium Dynamics underlies Differences in GABAergic and Glutamatergic Responsiveness To Depolarisation Claudia Verderio & Michella Mateolli Neuron,Vol 4, 599-610, February 19,2004 HIPPOCAMPUS Physiological processes : Memory Learning Orientation Pathological processes : Epilepsy Ischemia Alzheimer Tranche d`Hippocampe CA1 CA3 Vm HILUS Stimulation Deux types de neurones Pyramidal cells 90% GLUTAMATE Excitation Interneurones (10 %) GABA Inhibition Cellule pyramidales Interneurone GABAergic Révélation experimentale spécifique V-GLUT Transporteur vésiculaire du Glutamate V-GAT Transporteur vésiculaire du GABA GAD Enzyme de synthèse du GABA (glutamin acid decarboxylase) What is a synaptic current ? rs 10-90%, t 10 ms Whole cell recording sIPSC What is a synaptic current ? Glu sEPSC GABAergic activity glutamatergic activity Spontanés sEPSC sIPSC PA Ca 2+ Na+ Fusion Sans PA Miniatures +TTX PA mEPSC Ca 2+ Na+ Fusion Sans PA mIPSC Indications supplementaire Syst-ecto Ab : AC anti synaptotagmin KCL 10-50 mM Stimulation chimique pour depolariser les neurones TTX : Tetrodotoxin Bloque les canaux Na+ dependants APV :100 microM Blocage des recepteurs NMDA actives par le glutamate CNQX :20 microM Blocage des recepteurs AMPA/KA actives par le glutamate Bicuculline : 20 microM Blocage des recepteurs GABAa actives par le GABA Syst-ecto Ab Pour l’article : Détermination de la concentration intra cytoplasmique de Ca2+ Utilisation d’un colorant sensible au Ca2+ : ex. Magfura, Aequorin J : faible affinité au Ca2+: 10-4 M Mesure de la fluorescence émise après stimulation Microdomains of high calcium concentration in a presynaptic terminal Quanta stable microdomain Absence de stimulation a Fluorescence image of a presynaptic terminal injected with n-aequorin-J. When the presynaptic fibre is fully loaded, it is continuously stimulated at 10 Hz for 10 s. Adapted from Llinas R, Sugimori M, Silver RB (1992) Science 256, 677-679, with permission Docking : interaction spécifique de différentes protéines Palade, 1970: reconnaissance spécifique entre la membrane vésiculaire et plasmatique Rothman et al. Bases moleculaire de cette interaction specifique Purification des plusieurs proteines essentielles pour les processus de docking et de fusion Fusion : processus dependant de l`ATP et du Ca2+ Adapted from Calakos N, Scheller H (1996) Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description, Physiolog. Rev. 76, 1-29, with permission. Machinerie de la libération Blocage de l`exocytose par les differentes toxines TeNT : Tetanus neurotoxin BoTNs: Botulinum neurotoxin TeTN et BoTN/B Clivage selectif de R-Snare Synaptobrevin/Vamp BoNT/A ou E Proteolyse Q-SNARE SNAPE 25 Indications supplementaire Fura 2 : Colorant sensible au Ca2+ Ryanodine (1microM) et cyclopiazonic acid (30 microM) Bloquant du recepteur Ryanodine sur RE et de la pompe Ca2+ SERCA TTX : Tetrodotoxin Bloque les canaux Na+ dependants APV :100 microM Blocage des recepteurs NMDA actives par le glutamate CNQX :20 microM Blocage des recepteurs AMPA/KA actives par le glutamate Bicuculline : 20 microM & Picrotoxin Blocage des recepteurs GABAa actives par le GABA
